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艾滋病檢測(cè)現(xiàn)狀

三、HIV RNA定量測(cè)定(病毒載量檢測(cè))及HIV核酸定性檢測(cè)

HIV核酸檢測(cè)可用于HIV感染的輔助診斷、病程監(jiān)控、指導(dǎo)治療方案及療效判定、預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展等。常用的HIV病毒載量檢測(cè)方法包括逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)(RT-PCR)、核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)(NASBA)、分支DNA雜交實(shí)驗(yàn)(bDNA)以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。值得注意的是,每一種HIV RNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測(cè)限,即可以測(cè)出的最低拷貝數(shù)或國(guó)際單位,RNA定量檢測(cè)時(shí)未測(cè)出不等于樣品中不含有病毒RNA,因此HIV核酸定性檢測(cè)陰性,只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性,但不能排除HIV感染;HIV核酸檢測(cè)陽性,可作為診斷HIV感染的輔助指標(biāo),不能單獨(dú)用于HIV感染的診斷。報(bào)告HIV核酸定量檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)按照儀器讀數(shù)報(bào)告結(jié)果,注明使用的實(shí)驗(yàn)方法、樣品種類和樣品量,當(dāng)測(cè)定結(jié)果小于最低檢測(cè)限時(shí),應(yīng)注明最低檢測(cè)限水平。
HIV核酸定性檢測(cè)也可用于HIV感染的輔助診斷,目前在分析HIV基因亞型和變異等基礎(chǔ)研究中應(yīng)用。通常使用PCR或RT-PCR技術(shù),使用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室通用的擴(kuò)增試劑,引物可來自文獻(xiàn)或自行設(shè)計(jì),應(yīng)盡量覆蓋所有或常見的毒株,也可使用復(fù)合引物。報(bào)告定性檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。此外,利用核酸檢測(cè)方法的高度敏感性,使用集合核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)和方法,對(duì)高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進(jìn)行集合核酸檢測(cè),可及時(shí)發(fā)現(xiàn)窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測(cè)具有更高的成本效益。
四、CD4+ T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)

CD4+T淋巴細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)最重要的細(xì)胞之一。HIV以CD4+T淋巴細(xì)胞為靶細(xì)胞,感染后可導(dǎo)致CD4+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行性下降,使機(jī)體免疫功能受損,最終因機(jī)會(huì)性感染及腫瘤而死亡。CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)值的檢測(cè)在HIV感染的以下方面發(fā)揮了重要作用:了解機(jī)體的免疫狀態(tài)以確定疾病分期、監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)程、評(píng)估疾病預(yù)后、制定抗病毒治療及機(jī)會(huì)性感染預(yù)防性治療方案及評(píng)估抗病毒治療療效等。目前用于CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的方法分為自動(dòng)檢測(cè)方法和手工操作法。自動(dòng)檢測(cè)方法包括流式細(xì)胞儀(單平臺(tái)一步法、多平臺(tái)三級(jí)程序法)和專門的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,手工操作方法則需要顯微鏡或酶聯(lián)免疫試驗(yàn)設(shè)備。目前檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法為流式細(xì)胞儀,可得出CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞的絕對(duì)值及占淋巴細(xì)胞的百分率。為確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性,應(yīng)制定質(zhì)量保證計(jì)劃,建立內(nèi)部質(zhì)量控制制度,并參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。


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