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γ干擾素釋放分析T-SPOT.TB診斷結(jié)核感染臨床應(yīng)用



中RD1 包含9個(gè)開(kāi)放讀碼框(Rv3871 ~Rv3879 c), 被證實(shí)在所有的卡介苗菌株中均不存在,因此最具有編碼特異性抗原的潛質(zhì)。結(jié)核感染后體內(nèi)長(zhǎng)期存在抗原特異性的記憶性T 細(xì)胞, 當(dāng)再次遇到抗原刺激時(shí), 能迅速活化增殖, 釋放γ干擾素。綜合以上原理, 英國(guó)學(xué)者Lalvani 建立了以RD1 編碼的結(jié)核特異性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(early secreting antigen target-6, ESAT-6) 和10 kD培養(yǎng)濾過(guò)蛋白(culture filtrate protein-10, CFP-10)肽段庫(kù)為刺激原, 檢測(cè)外周血中結(jié)核特異性釋放C干擾素的T淋巴細(xì)胞, 從而診斷結(jié)核感染的新方法。T-SPOT.TB2004年在歐洲、2005年在加拿大被批準(zhǔn)使用, 美國(guó)FDA的審批在2008年完成。T-SPOT.TB是目前C干擾素釋放分析診斷結(jié)核感染的最主要方法之一。

T-SPOT.TB的實(shí)驗(yàn)結(jié)果清晰, 易于判斷。實(shí)驗(yàn)設(shè)有空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照以及以ESAT-6 和CFP-10肽段庫(kù)作為刺激原的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)孔。空白對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)小于10且陽(yáng)性對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)大于20時(shí)視為實(shí)驗(yàn)有效。當(dāng)空白對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)小于6時(shí), 任一實(shí)驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)減去空白對(duì)照后大于等于6, 結(jié)果判為陽(yáng)性; 當(dāng)空白對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)大于6時(shí), 任一實(shí)驗(yàn)孔斑點(diǎn)數(shù)大于空白對(duì)照的2倍, 結(jié)果判為陽(yáng)性。T-SPOT.TB的實(shí)驗(yàn)結(jié)果用每106PBMCs中斑點(diǎn)形成細(xì)胞(spot forming cells, SFC s)的數(shù)目來(lái)描述, 即SFCs/106PBMCs。
T-SPOT.TB的臨床意義
敏感性與特異性評(píng)價(jià):潛伏性結(jié)核感染的診斷無(wú)金標(biāo)準(zhǔn), T-SPOT.TB 敏感性評(píng)價(jià)多在培養(yǎng)或病理陽(yáng)性的活動(dòng)性結(jié)核患者中進(jìn)行。Pai等對(duì)近3 年的13項(xiàng)研究進(jìn)行Meta分析, 這些研究共納入726例受試者, 絕大多數(shù)是結(jié)核培養(yǎng)陽(yáng)性、HIV 陰性的成年人, 分析表明T-SPOT.TB 的綜合敏感性為90%。在免疫力低下的人群中, T-SPOT.TB依然能夠維持較高的敏感性。Chapman等研究顯示39例HIV陽(yáng)性的結(jié)核患者中T-SPOT.TB的敏感性為90%, 而PPD 皮試的陽(yáng)性率僅為72%。Liebeschuetz等報(bào)道了對(duì)293例懷疑結(jié)核的非洲兒童的隨訪結(jié)果, 這些兒童的平均年齡為3 歲, 約46% HIV 陽(yáng)性, 多數(shù)合并營(yíng)養(yǎng)不良, 對(duì)于確診結(jié)核或高度懷疑結(jié)核的病例, T-SPOT.TB的陽(yáng)性率為83%, PPD 皮試的陽(yáng)性率為63%, 兩者差異具有顯著性(P<0.001)。數(shù)據(jù)分析顯示年齡、HIV 感染狀態(tài)和營(yíng)養(yǎng)不良的嚴(yán)重程度對(duì)T-SPOT-TB結(jié)果無(wú)影響, 但均能導(dǎo)致PPD 皮試結(jié)果的顯著差異。提示T-SPOT.TB 在免疫力低下的個(gè)體中具有更高的診斷效能。Nicol等在2009年發(fā)表了對(duì)243 例可疑結(jié)核的嬰幼兒的研究結(jié)果,這些嬰幼兒平均年齡為18個(gè)月, 在經(jīng)痰或胃灌洗液結(jié)核菌培養(yǎng)陽(yáng)性確診的病例中, T-SPOT.TB 的陽(yáng)性率僅為50%, 而年齡大于12個(gè)月的幼兒與12個(gè)月之內(nèi)的嬰兒相比, 前者陽(yáng)性率明顯增高, 提示在嬰兒中診斷結(jié)核感染會(huì)降低T-SPOT.TB的敏感性。在肺外結(jié)核的診斷中, T-SPOT.TB 具有較高的敏感性。Ferrara等和Lee等報(bào)道的兩個(gè)前瞻性研究中, 共包括18例肺外結(jié)核患者, T-SPOT.TB 的陽(yáng)性率為100% 。Kmi 等隨診72例懷疑肺外結(jié)核患者的前瞻性研究顯示, 對(duì)于活動(dòng)性肺外結(jié)核, T-SPOT.T和PPD的敏感性分別為94%和47%, 二者比較差異具有顯著性(P<0.001)。47% 的隨診對(duì)象合并有導(dǎo)致免疫低下的情況, 包括HIV 感染、腫瘤、移植、糖尿病以及自身免疫病等, 可能是導(dǎo)致PPD皮試的陽(yáng)性率顯著降低的原因。T-SPOT.TB特異性評(píng)價(jià)的研究都在結(jié)核低流行區(qū)進(jìn)行。Pai等的Meta分析中納入了6項(xiàng)研究,其中5項(xiàng)中的受試者都常規(guī)地接受BCG免疫。6項(xiàng)研究共包括290名受試者, 93% 為無(wú)結(jié)核接觸史的健康成年人, 其綜合特異性為93%。



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